>  资讯
资讯

单细胞悬液制备集锦

浏览次数:2001

分享:

对于要进行细胞培养,单细胞测序,细胞分型检测,细胞分选,提蛋白/RNA、抗体批量生产等实验的老师来说,获得高质量的细胞是实验成功的第一步,那细胞从何而来?
 
 
一部分老师选择使用细胞系开展实验,比如BHK细胞系(幼地鼠肾细胞),Vero细胞系(非洲绿猴肾细胞)、Hep-2细胞系(人喉表皮样癌细胞)……

也有一部分老师选择获取原代细胞,可以是源于血液中的细胞,比如:人外周血中免疫细胞(T、B、NK、Mo细胞)等;源于组织样本中的细胞,比如:小鼠脾脏中的免疫细胞、肿瘤组织中的TIL细胞等;源于贴壁细胞,比如单核诱导贴壁后形成的巨噬细胞、树突状细胞等;源于悬浮细胞,比如:腹水中的免疫细胞。

针对不同的样本类型,如何制备高质量的单细胞悬液,小编为您一一讲述。

(1)外周血样本    

对于病人外周血,我们要先对其进行Ficoll密度梯度离心,根据不同细胞密度不同,进而将其处理成PBMC(单个核细胞),操作流程如下:

•获取抗凝全血,用PBS进行2-4倍稀释;        •按照1:1比例,加入Ficoll试剂和稀释后的样本;

 

 

•20℃,400xg离心30min;(具体参见说明书)         •离心结束,细胞分层,白膜层即为PBMC

 

 

附件:人外周血样本中不同免疫细胞占比如下:

 

 
(2)组织样本
如果从组织样本中提取原代细胞,问题来了?是否需要用酶消化?选择什么样的酶?消化多长时间?如何终止消化?
 
 

 
常见的组织类型:小鼠脾脏、肝脏、心脏、肺脏、脑组织、肿瘤组织、人肿瘤组织、皮肤组织……
 
 传统组织处理方法
机械法:剪碎法、网搓法、研磨法
•适用样本类型:脾脏、淋巴结、胸腺

酶解法:胰蛋白酶类、胶原酶、溶菌酶、弹性蛋白酶
•适用样本类型:肝脏、肾脏、心脏、肺脏、脊髓、脑、肠道、皮肤、肿瘤等;

 
GentleMACS组织处理法
•原理:结合机械法和酶解法,轻轻松松完成高得率,高活性的单细胞悬液制备,无须考虑用什么酶;无须考虑如何终止、无须考虑孵育时间,一起看看如何实现的吧?
 
 
 
 
•应用:美天旎公司推出的产品gentleMACS 全自动组织处理器(gentleMACS Dissociator),可以温和、安全、省时、自动化的从组织中分离单个细胞悬液,及将组织块制备成匀浆。

免疫学

小鼠的脾脏、大鼠脾脏、人类组织的扁桃腺以及肿瘤免疫和肿瘤干细胞研究用的实体瘤组织

神经科学

胚胎、成体动物的大脑(大鼠或小鼠)。联合使用gentleMACS和MACS神经组织分离试剂盒,可以快速方便地从脑组织中分离样品,避免了传统机械分离方法的繁琐操作

干细胞和组织再生

使用一些小鼠和人组织(脑,肝脏,肾,皮肤,肌肉,心脏,实体瘤等)研究组织和组织再生相关标本来源的非造血干细胞

细胞生物学

内皮细胞和表皮

分子生物学

配合M管,可以分离亚细胞物质,如核酸和蛋白质。M管可以处理不同体积的标本,最多达10ml

 
•操作视频
示例:小鼠肿瘤组织消化成单细胞悬液
 
 
相关产品推荐

用途

产品名称

货号

规格

肿瘤组织解离试剂盒,小鼠

Tumor Dissociation Kit, mouse

130-096-730

50 T

过滤细胞团块或细胞碎片

MACS SmartStrainer(70 μm)

130-098-462

50个

gentleMACS C 管

gentleMACS C tube

130-093-237

25个

带加热模块的全自动组织处理器

gentleMACS Octo Dissociator with heaters

130-096-427

Set

*MACS 组织保存液(保存新鲜组织48h)

MACS Tissue Storage Solution

130-100-008

100 mL

*红细胞裂解液(10×)

Red Blood Cell Lysis Solution (10×)

130-094-183

50 mL


 
(3)贴壁细胞
贴壁细胞(adherent cells):活体体内细胞当离体置于体外培养时大多数以贴壁方式生长,主要包括正常细胞(例如:成纤维细胞、巨噬细胞、神经胶质细胞、心肌细胞以及肝、肺、肾、乳腺、皮肤细胞等)和肿瘤细胞。

•胰蛋白酶消化
胰蛋白酶:最常用,浓度一般0.25%-5%,37℃消化时间一般1-5min,用血清终止;胶原酶:一般用于组织样本消化成单细胞,作用温和,用血清终止。

•离子螯合剂
EDTA:用的比较多,一般浓度在0.02%左右;商品化无酶消化液:分离成单细胞作用强,但是对细胞损伤比较大。
  
(4)悬浮细胞
悬浮细胞包括临床上常见的胸腹水细胞,尿液,脱落细胞等,这些细胞经过简单处理,就可以应用于下游流式分析,细胞分选,细胞培养等实验,具体操作见:悬浮细胞单细胞悬液制备。
 
详细信息,请回顾往期流式课堂—第37期 流式分析&分选前样本制备
 

 

 

上海优宁维生物科技股份有限公司

试剂 | 耗材 | 仪器 | 软件 | 定制 | 实验服务 | 供应链

免费热线:4008-168-068

咨询邮箱:info@univ-bio.com

订购商城:www.univ-bio.com

微信公众平台:优宁维抗体专家,欢迎关注!

小优博士(小程序):5大课堂, 让你的科研不再难!

公众号
小程序